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　　擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶(雜帶)

1) 引物用量偏大，引物的特異性不高。

應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。

2) 循環(huán)的次數(shù)過(guò)多。

適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。

3) 酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好。

應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶。

4) 退火溫度偏低，退火及延伸時(shí)間偏長(zhǎng)。

應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時(shí)間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計(jì)梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。

5) 樣品處理不當(dāng)。

6) Mg2+濃度偏高。

質(zhì)粒pcr跑膠如何看結(jié)果

一般空載擴(kuò)出片段較小，插入片段的質(zhì)粒擴(kuò)增片段較大，具體看載體及插入片段大小來(lái)判斷是否為陽(yáng)性克隆，及是否為目標(biāo)片段。

因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。

7) 若為PCR試劑盒。

也可能時(shí)試劑盒本身質(zhì)量有問(wèn)題。

8) 復(fù)制提終止。

使用非熱啟動(dòng)的聚合酶時(shí)常有發(fā)生。冰上準(zhǔn)備反應(yīng)體系或采用熱啟動(dòng)聚合酶。

9) 反應(yīng)緩沖液未完/全融化或未充分混勻。

確保反應(yīng)緩沖液融化完/全并徹/底混勻。

10) 引物特異性差。

利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。

11) 引物量過(guò)多。

減少反應(yīng)體系中引物的用量。

12) 模板量過(guò)多。

質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng，而基因組DNA則應(yīng)<200ng。

13) 外源DNA污染。

確保操作的潔凈。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司