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吖啶橙（AO）熒光染色試劑盒（兩步法） 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

    吖啶橙（Acridine Orange, AO）屬于三環(huán)雜芳香燃料, 既可以標(biāo)記 DNA，又可以標(biāo)記

RNA,屬于異染性熒光染料，因此 AO 常用于細(xì)胞內(nèi) DNA 和 RNA 進(jìn)行檢測(cè)。 

    AO 與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO 嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，這種

結(jié)合方式主要為 AO 與 DNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的 AO 與單鏈核酸的磷酸根（帶負(fù)電荷）產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為 AO 與 RNA 的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會(huì)呈桔黃色或桔紅色熒光。 

     Acridine Orange 具有膜通透性，能透過(guò)細(xì)胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。因此，

在熒光顯微鏡下觀察， 吖啶橙可透過(guò)正常細(xì)胞膜， 使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；

而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使

其染上致密濃染的黃綠色熒光， 或黃綠色碎片顆粒； 而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。 

產(chǎn)品組成： 

主要成分：  

試劑（A）: 主要由 Detergent、去離子水等組成。 

試劑（B）: 主要由金屬鹽離子、去離子水等組成。 

試劑（C）: 主要由 Acridine Orange、去離子水等組成。 

試劑（D）: 主要由磷酸鹽、氯化鈉、去離子水等組成。 

自備材料： 

1、 熒光顯微鏡                    

2、 PBS 

3、 預(yù)冷的固定液：4%多聚甲醛固定液或 70%乙醇 

4、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板 

5、 載玻片 

操作步驟（僅供參考） ： 

1、 AO Detergent 工作液的配制: 取適量的 AO Detergent 與 AO Detergent Dilution 

Buffer， 按 AO Detergent： AO Detergent Dilution Buffer： 蒸餾水或去離子水=1:1:8

稀釋待用。混合后可以 4℃儲(chǔ)存 2 周。 

2、 AO 染色工作液的配制:將 AO 儲(chǔ)備液（1mg/ml）用蒸餾水或去離子水按 9:1 稀釋后，

再用 AO Detergent Dilution Buffer 將 AO 稀釋到*終濃度為 6mg/ml，4℃儲(chǔ)存。AO

染色工作液儲(chǔ)存時(shí)間較短，配制 24h 后不可用。 

3、 細(xì)胞計(jì)數(shù)，取 1´10

6

/ml 細(xì)胞。 

4、 PBS 清洗細(xì)胞，低速離心后，去除固定液，獲得細(xì)胞沉淀。 

5、 加入 0.4ml 或適量的 AO Detergent 工作液，混勻靜置 30s。 

6、 迅速加入 0.4ml 或適量的 AO 染色工作液。 

7、 室溫（23～25℃）下, 染色 10～15min。 

8、 上機(jī)分析或熒光顯微鏡下觀察。 

注意事項(xiàng)： 

1、 AO 與核酸的結(jié)合在低濃度下*佳，插入性強(qiáng)，結(jié)合方式占優(yōu)勢(shì)（AO/DNA-P<0.2）。 

2、 在雙參數(shù)染色時(shí)， 使 RNA 在原位上形成單鏈 （采取酸變性） ， 可以用 EDTA 解鏈法，

AO 也可以使沒(méi)有解鏈的 RNA 繼續(xù)解鏈。 

3、 AO 分子量大，不易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，可以用 AO Detergent 在細(xì)胞膜上打開(kāi)通道，一般用

AO Detergent，使 AO 進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。 

4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

有效期： 6 個(gè)月有效。 

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司