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    上海遠慕生物：單克隆抗體鑒定  抗體

    對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的，應做下述幾個方面的鑒定：

    1．抗體特異性的鑒定

    除用免疫原（抗原）進行抗體的檢測外，還應該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進行交叉試驗，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細胞的McAb，除用黑色素瘤細胞反應外，還應該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體，應首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應，其次是與其它細胞因子間有無交叉。

    2．McAb的Ig類與亞類的鑒定

    一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進行篩選時已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM，則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標準抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時，如加入適量的PEG（3%），更有利于沉淀線的形成。

    3．McAb中和活性的鑒定

    用動物或細胞的保護實驗來確定McAb的生物學活性。例如，如果確定抗病毒McAb的中和活性，則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細胞，來觀察動物或細胞是否得到抗體的保護。

    4．McAb識別抗原表位的鑒定

    用競爭結(jié)合試驗，測相加指數(shù)的方法，測定McAb所識別抗原位點，來確定McAb的識別的表位是否相同。

    5．McAb親合力的鑒定

    用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗來確定McAb與相應抗原結(jié)合的親合力。

    多克隆抗體的制備

    一般包括以下幾個步驟：

    1、制備抗原。

    2、選擇實驗動物。

    3、動物免疫。

    4、試取血進行測試，看看是否成功免疫。

    5、如果成功免疫，殺死實驗動物，采集全部血清。

    6、純化出抗體。

    7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司