分析ELISA實(shí)驗(yàn)操作過程中影響結(jié)果的原因及解決辦法
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良的試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量�，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。
現(xiàn)在讓遠(yuǎn)慕生物王經(jīng)理為您分析下ELISA實(shí)驗(yàn)操作過程中影響結(jié)果的原因并給出了相對應(yīng)的解決方法如下：
一：加樣
可能原因：
1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；
2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：
1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2.加樣后及時放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
二：孵育
可能原因：
1.孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底;
2.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。
解決辦法：
1.貼封片或加蓋；
2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。
三：洗板
可能原因：
1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞，抽吸不完全;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。
3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：
1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。
四：顯色
可能原因：
1.顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；
2.加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：
1.顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
2.加樣時保持顯色劑不外流；
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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