肝素-瓊脂糖凝膠
1 簡(jiǎn)介
肝素是一種含硫酸酯的酸性多糖,將它偶聯(lián)到交聯(lián)及活化的瓊脂糖凝膠上,該填料具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性。
肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子結(jié)合,所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質(zhì)的純化。
本產(chǎn)品穩(wěn)定性好,基團(tuán)脫落少,使用壽命長(zhǎng),使用方便,應(yīng)用廣泛。
2 親和填料特性
特點(diǎn) | 基團(tuán)脫落少,結(jié)合特異性強(qiáng) |
基質(zhì) | 6%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
配基 | 肝素 |
配基密度 | 5mg/ml |
吸附載量 | 2-3mg 抗凝血因子Ⅲ(AT Ⅲ )/ml |
親和填料的顆粒大小 | 45-165μm |
流速 | 300cm/h |
pH范圍 | 4-10,在位清洗時(shí)pH范圍可到3-13 |
使用溫度 | 4℃~常溫 |
保存溫度 | +4~8℃ |
保存液體 | 20%乙醇 |
3 適用范圍
肝素瓊脂糖凝膠用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結(jié)合蛋白、限制內(nèi)切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子的分離純化。
4 親和填料應(yīng)用的注意事項(xiàng):
(1)該凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復(fù)到室溫,然后再裝柱,以免產(chǎn)生氣泡影響柱效;
(2)吸附:20-50mM,pH7.4-8.0的緩沖液,為避免離子交換的干擾,緩沖液中可以適當(dāng)加50mM-100mM的NaCl,,*常用的為T(mén)ris-HCl緩沖液;
(3)洗脫:可以用pH7.4-8.0的緩沖液加0.2-2M進(jìn)行階段或者線性洗脫;
(4)上樣樣品必須與平衡柱子的緩沖液的pH、電導(dǎo)相同;
(5)不同的樣品,吸附和洗脫方法不相同,可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行;
(6)肝素瓊脂糖凝膠親和填料的再生處理方法:先用0.1M Tris-HClpH7.0緩沖液洗3個(gè)柱床體積,然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3個(gè)床體積,*后用20%乙醇洗 3個(gè)床體積即可。長(zhǎng)時(shí)間用酸堿洗填料會(huì)是填料的吸附能力下降,所以清洗要盡量縮短時(shí)間;
(7)該親和填料保存條件為20%乙醇,4-8℃。