酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的雙位點(diǎn)一步法
遠(yuǎn)慕生物-elisa試劑盒 酶聯(lián)免疫試劑盒供應(yīng)商
雙位點(diǎn)一步法的應(yīng)用
適用于雙抗體夾心法的Elisa試劑盒，有些也可用雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)。如HBsAg同樣可用此法進(jìn)行檢測(cè)，其原理為：將純化的抗HBs吸附于固相載體表面，加入待檢血清(或血漿)，同時(shí)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的另一個(gè)抗HBs(酶結(jié)合物)，如血清或血漿中含有HBsAg，則通過溫育形成固相McAb-HBsAg-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加入底物，通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。若血清或血漿中不含HBsAg，通過洗滌除去未結(jié)合物，加底物后就不顯色。由于應(yīng)用McAb，雙位點(diǎn)一步法具有很高特異性，一步法省時(shí)、簡(jiǎn)便。
在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步法不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
雙位點(diǎn)一步法的操作步驟
1、將1個(gè)McAb與固相載體連接，形成固相McAb。洗滌除去未結(jié)合物。
2、同時(shí)加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)McAb，溫育，是待檢抗原和固相McAb及酶標(biāo)McAb反應(yīng)形成雙抗體夾心復(fù)合物。洗滌除去未結(jié)合物。
3、加底物顯色。
雙位點(diǎn)一步法注意事項(xiàng)
當(dāng)待檢抗原濃度過高時(shí)，大量過�？乖謩e飽和固相McAb和酶標(biāo)McAb而抑制夾心復(fù)合物的形成，這種現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)(hookeffect)，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果�？蓪⒋龣z標(biāo)本稀釋后再做或提高抗體試劑的親和力、濃度、純度定以消除鉤狀效應(yīng)。
Elisa試劑盒雙位點(diǎn)一步法應(yīng)用識(shí)別抗原不同位點(diǎn)2個(gè)單克隆抗體(McAb)作雙抗體夾心法測(cè)定。包被一個(gè)McAb后，同時(shí)加入待檢抗原和另一個(gè)McAb酶標(biāo)物，待檢抗原上的2個(gè)抗原決定簇同時(shí)與固相McAb和酶標(biāo)McAb結(jié)合，形成固相McAb-待檢抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物，加底物通過顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
客服一
