ELISA實(shí)驗(yàn)血液樣本收集方法：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
標(biāo)本的存放溫度及時間，血清、血漿及細(xì)胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗(yàn)結(jié)果的重要因素。抽血后，血細(xì)胞因代謝需要，要消耗掉部分營養(yǎng)成分，故對這些成分進(jìn)行測定時，需及時地離心以分離掉細(xì)胞成分。
采血前個體的準(zhǔn)備情況，如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢；止血帶應(yīng)用時間，輸液情況，體育運(yùn)動，抗凝劑及穩(wěn)定劑的選用；標(biāo)本的處理等均可影響到某些檢驗(yàn)指標(biāo)的水平。故標(biāo)本采集過程應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，以限度地減少分析前誤差。
一、不抗凝收集血清：
1、無添加劑的干燥空管收集:
血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)檢測。
亦可直接用干燥EP管收集全血，充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后，離心分離出血清待用或保存。
2、用促凝管收集:
采血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油，同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體，進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊，如果想快點(diǎn)出結(jié)果時，可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時，直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。
3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集：
用促凝管的優(yōu)點(diǎn)：
①、加速紅細(xì)胞的凝固，無需長時間的靜置；
②、帶有分離膠，有效的將血清分離出來，更好的避免溶血；
收集血清的缺點(diǎn)：
①、需要紅細(xì)胞的充分凝固，所需靜置時間較長；
②、分離出的血清相對較少，1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。
二、抗凝收集血漿：
收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
1、肝素抗凝：
*常用的抗凝劑，一般情況下對相關(guān)指標(biāo)都不會有干擾，同時抗凝比例較大（抗凝劑：全血=1:30），對血液基本沒有稀釋影響。
2、EDTA抗凝：
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸，可以有效地鰲合血液中的鈣離子，鰲合鈣會將鈣從
反應(yīng)點(diǎn)移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程，從而防止血液凝固，與其他抗凝劑比較而言，其對血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小，故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查，不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
3、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用，國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦為3.2％或3.8％，抗凝劑與血比例為1：9，主要用于纖溶系統(tǒng)(凝血酶原時間、凝血酶時間、活化部分凝血酶時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較小（抗凝劑：全血=1:9），對血液有一定的稀釋，一般不建議。
三、收集血清、血漿所用離心轉(zhuǎn)速：
分離血清或血漿，根據(jù)種屬不同，離心轉(zhuǎn)速也有差異,推薦離心轉(zhuǎn)速為:
①、小鼠：一般1000-1500轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘；
②、大鼠、兔子：一般2000-2500轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘；
③、人：一般2500-3000轉(zhuǎn)/分，離心8-10分鐘。
四、高脂及溶血因素的影響:
溶血的影響:
溶血對某些檢驗(yàn)指標(biāo)的的影響不僅取決于所采用的方法，也取決于所用的分析儀器。采用雙波長測定法可在一定程度上消除Hb的顏色干擾，然而Hb的干擾并不能完全消除，尤其是當(dāng)Hb可以與采用的試劑發(fā)生作用時。總的來說，輕微的溶血，對大多數(shù)臨床化學(xué)指標(biāo)的測定方法無明顯干擾。嚴(yán)重的溶血，可能有兩方面的影響：（1）測定成分在紅細(xì)胞內(nèi)的濃度高于血漿時，導(dǎo)致測定結(jié)果偏高；（2）測定成分在RBC內(nèi)濃度低于血漿時，產(chǎn)生輕微的稀釋效應(yīng)。
五、全血或紅細(xì)胞的收集及保存
測定全血或者是紅細(xì)胞中相關(guān)指標(biāo)的話，首先需要收集抗凝全血。
全血：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷蒸餾水制備溶血液后用于不同指標(biāo)的檢測；也可定量吸取全血，轉(zhuǎn)入EP管，低溫凍存（溫度越低越好），測定之前解凍并按比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測。紅細(xì)胞：收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，直接離心吸走血漿，留下層紅細(xì)胞，加入3倍體積的生理鹽水，輕輕顛倒混勻，500～1000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘，棄上清留沉淀紅細(xì)胞,重復(fù)2～3次,至上清液無色為止（洗滌紅細(xì)胞）。
①、直接定量吸取紅細(xì)胞，按比例加入冷蒸餾水制成溶血液待測；
②、定量吸取紅細(xì)胞，轉(zhuǎn)入EP管，立即低溫凍存（溫度越低越好），測定之前解凍，并按
比例加入冷蒸餾水制成溶血液用于檢測(解凍后部分紅細(xì)胞會破裂,因此樣本冷凍保存之前必須進(jìn)行定量)。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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