技術(shù)文獻(xiàn)
| 1 |
| 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 7 |
底物夜A | 6mL |
| 2 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品：200ng/ml | 0.6mL | 8 |
底物夜B | 6mL |
| 3 |
| 20倍濃縮洗滌液 | 20mL | 9 | 終止液 | 6mL |
| 4 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 10 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
| 5 |
| 樣本稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 1張 |
| 6 |
| 酶標(biāo)試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
備注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml
牛甘油磷酸膽堿(GPC)ELISA試劑盒
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3、 精密移液器及一次性吸頭
4、 蒸餾水
5、 一次性試管
6、 吸水紙
【試劑盒操作步驟】
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。
12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。*終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項(xiàng)】
1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過(guò)此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（0.1-200ng/ml范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本*終濃度。
6、若顯色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。
9、底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
牛甘油磷酸膽堿(GPC)ELISA試劑盒【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
【ELISA試劑盒檢測(cè)范圍】
0.1-200ng/ml
【試劑盒規(guī)格】
96T/盒、48T/盒
【試劑盒貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個(gè)月
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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