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技術(shù)文獻(xiàn)

植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒如何使用
閱讀次數(shù):844 發(fā)布時(shí)間:2017/11/6 9:35:08
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    中文名:植物赤霉素(GA)elisa試劑盒

    別名:植物赤霉素(GA)ELISA Kit

    供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

    規(guī)格:48t/96t

    保存:2-8℃低溫保存

    有效期:6個(gè)月

    適用范圍:僅限科研實(shí)驗(yàn),不作臨床使用。

    用途:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。

    特點(diǎn):敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便。

    特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。


 


 

    ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。

    引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:

    ①標(biāo)本因素;

    ②試劑因素;

    ③操作因素。

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒試劑組成

    植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒若干特點(diǎn):

    專(zhuān)一性強(qiáng):抗原與抗體的免疫反應(yīng)是專(zhuān)一反應(yīng),而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測(cè)的對(duì)象是抗原(或抗體),使用的抗體除標(biāo)記了酶以外,與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無(wú)多大差別。

    靈敏度高:由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),顯示抗原與抗體的結(jié)合,大大提高了檢測(cè)的靈敏性,使檢測(cè)水平接近放射免疫測(cè)定法。

    樣品易保存:經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,因此有利于樣品的保存。

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒液體類(lèi)標(biāo)本要求:

    包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

    1)血清:

    室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    2)血漿:

    應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    3)尿液:

    用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

    4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:

    檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    5)組織標(biāo)本:

    切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

    植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒包含以下各組分:

    (1)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;

    (2)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

    (3)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);

    (4)酶的底物;

    (5)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),ELISA試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);

    (6)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒操作流程:

    1,試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。

    2,實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

    3,不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

    4,使用一次性的吸頭以免交叉污染,避免使用帶金屬部分的加樣器。

    5,使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

    6,洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

    7,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

    8,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作方法進(jìn)行操作。說(shuō)明書(shū)以英文說(shuō)明書(shū)為主。

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒預(yù)期應(yīng)用注意事項(xiàng):

    1.不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性。

    2.若不同批號(hào)EILSA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。

    3.反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),孔和*后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。

    4.臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正�,F(xiàn)象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

    5.加樣時(shí)樣品量誤差,對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響極大,建議校對(duì)加樣器。

    植物赤霉素(GA)ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)方法:

    1、加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽(yáng)性對(duì)照2孔,HBsAg陰性對(duì)照2孔,空白對(duì)照1孔,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對(duì)照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。

    2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,反復(fù)五次后拍干。

    3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。

    4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。

    注意事項(xiàng):

    1、試劑盒置2℃~8℃保存。

    2、使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。

    3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測(cè)標(biāo)本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測(cè)試,余者應(yīng)及時(shí)封存于冰箱中以備后用。

    植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒標(biāo)本采集及保存:

    1、 新鮮植物組織請(qǐng)?jiān)谝旱谐浞盅心ィ?/p>

    2、 加進(jìn)樣品體積3倍的提取液(10% TCA), 置于-20 過(guò)夜;

    3、 請(qǐng)于4 ,8000rpm,離心1小時(shí),棄上清,收集沉淀;

    4、 沉淀加進(jìn)等體積的冰浴丙酮,混勻后于4 離心(8000rpm,15分鐘),棄上清并真空干燥,保存?zhèn)溆茫?/p>

    5、 上樣前加進(jìn)裂解液(2.7g 尿素,0.2g CHAPS,溶于往離子水中至終體積5ml),混勻后室溫放置30分鐘,然后4 離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時(shí)保存于4 待用。

    注:以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存,4 保存應(yīng)小于1周,-20 不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月,-80 不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月

原創(chuàng)作者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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