親和層析法是重組蛋白純化的重要方法，被廣泛應用蛋白質的研究域，是分離純化和分析生物大分子尤其是蛋白質的有力工具。免疫親和層析是親和層析方法的一種，該方法利用
抗體與其相應抗原的作用具有高度的特異性和高度結合力的特點，用適當?shù)姆椒▽⒖乖蚩贵w結合到層析載體上，便可有效的分離和純化各自互補的免疫物質。
目在重組蛋白純化中已經(jīng)使用單克隆抗體作為親和配體的親和層析方法，利用抗體-抗原模式，有可能得到每一種目標蛋白的單抗，然后以單抗為配基，通過親和層析技術分離純化重組蛋白。該種方法的純化配屬和活性回收率較高。通過研究發(fā)現(xiàn)，抗體與蛋白A或蛋白G微珠共價交聯(lián)后更容易與抗原結合。將具有良好抗原結合特性，且來源廣泛的各種單克隆抗體制成免疫親和層析柱，已成為一種實用和有效的重組蛋白純化方法。
重組蛋白技術在蛋白質結晶、蛋白質藥物、蛋白質相互作用及結構蛋白質組學研究中具有非常重要的作用。遠慕生物在重組蛋白表達與純化服務方面經(jīng)驗豐富，擁有多種蛋白表達系統(tǒng)，包括原核蛋白表達系統(tǒng)、酵母蛋白表達系統(tǒng)、昆蟲細胞蛋白表達系統(tǒng)（桿狀病毒）和哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)，具備多種融合技術，可以為客戶在蛋白表達與純化方面提供多種選擇。
1、小鼠腹水中JWA單克隆抗體制備的研究
JWA是一種新的微管結合蛋白，不僅參與全反式維甲酸（ATRA）誘導的細胞分化調節(jié)，而且與多種細胞分化、凋亡誘導劑的生物學作用有關，涉及相應的信號通路。JWA可以調節(jié)白血病細胞的分化，還可以通過絲裂原活化蛋白激酶MAPK信號通路調節(jié)腫瘤，如宮頸癌、乳腺癌和肝癌等細胞的遷移。JWA還活躍地參與細胞對應激刺激，如冷應激、熱應激和化學物誘導的氧化應激等的應答。
有研究者建立小鼠腹水中JWA單克隆抗體(Monoclonalantibody，mAb)的制備方法及鑒定，獲得高純度、高/效價的JWA單克隆抗體。先對預先用弗氏不完/全佐劑處理的小鼠腹腔接種JWA單克隆抗體雜交瘤細胞，收集小鼠腹水、離心，采用ProtienG親和柱層析法進行親和層析純化JWA單克隆抗體，并采用SDS-PAGE檢測方法分析純化抗體的純度。分別運用細胞免疫熒光、免疫印跡技術鑒定純化的抗體特異性。BCA法測定純化后JWA單抗的濃度為6.79mg/mL;SDS-PAGE電泳顯示純化的抗體只有IgG的重鏈和輕鏈，而沒有其它雜蛋白帶；純化后的JWA單抗在免疫熒光實驗可以檢測到細胞中JWA蛋白在胞漿中呈絲狀均勻分布，與期實驗結果一致。
免疫印跡實驗中1∶800、1∶400均可以得到清晰的目的條帶。用ProteinG親和層析法獲得了高純度和較高/效價的JWA單克隆抗體，這將為JWA蛋白的基礎和應用研究提供技術支持。
2、免疫親和層析方法的特點
免疫親和層析作為一種重組蛋白純化方法，也是一種既簡單又非常有效的分離抗原的技術。即將抗體共價結合到一種惰性的微珠上，然后將微珠與含有待純化抗原的溶液混合。當抗原被交聯(lián)在微珠上的抗體捕獲后，通過洗滌去除無關的抗原，然后用洗脫緩沖液處理微珠，結合的抗原被洗脫，從而得到純化的抗原。如果洗脫條件掌握較好而且比較溫和，純化的抗原仍能保持其天然狀態(tài)。雖然下述的所有實例都是以蛋白質抗原作為研究對象，但凡是能與抗體有效結合的分子都能用這種方法進行純化。
免疫親合層析具有以下特點：（1）抗體與其相應抗原結合具有高度親和力和特異性，能大量分離天然狀態(tài)或近似天然狀態(tài)的抗原；
（2）不是所有的抗體都適用于免疫親和層析，但一旦獲得一種性能良好的抗體，純化過程就簡單、快速、可靠；
（3）可按照不同規(guī)模進行，半天內即可完成，而且可以獲得其他層析法不可比擬的純化效果；
（4）經(jīng)過簡單的改進，免疫親和層析法也可用于純化針對抗原的特異性抗體。
影響免疫親和層析純化的因素主要有3個：先是抗原或抗體的初濃度，其次是兩者之間的親和力，再次是抗原抗體是否容易解離。有研究者利用吸附層析結合免疫親和層析的方法分離純化得到一種蛋白復合體，該復合體含有調節(jié)轉錄的輔阻遏物蛋白SMRT和N-CoR。還有研究者利用免疫親和層析從病人的血清中純化出抗神經(jīng)酰胺單己糖（CMH）的特異性抗體。
為了發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)治療疾病的蛋白，人們有必要進行重組蛋白純化。傳統(tǒng)的純化規(guī)程正被高度選擇性和成熟的以親和層析為基礎的策略所代替，親和層析可能是現(xiàn)行僅有的著重于高通量和擴大規(guī)模蛋白質組學關鍵問題的分離技術，主要的問題是設計新的技術來確定與假設目標相結合的高選擇性的親和配體。利用理性和組合的方法設計具高選擇性和穩(wěn)定性的配體對于親和層析未來的應用會有巨大的影響。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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