技術(shù)文獻(xiàn)
pUC18 和 pUC19質(zhì)粒圖譜
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是*常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注冊(cè)號(hào)為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來(lái)，其中 lacZ (MSC)來(lái)自 M13mp18/19 圖 3-4 是其質(zhì)粒圖譜 。
這兩個(gè)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完全一樣的，只是多克隆位點(diǎn)的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的 rop 基因，因此其拷貝數(shù)達(dá) 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細(xì)胞中可表現(xiàn) α-互補(bǔ)作用。因此在多克隆位點(diǎn)中插入了外源片段后，可通過(guò) α-互補(bǔ)作用形成的藍(lán)色和白色菌落篩選重組 質(zhì)粒。
特征序列區(qū)位：
&NBS p;
| pBR322_origin | &NBS p; | 1471 - 852 |
| Ampicillin | 2486 - 1626 | |
| lac_promoter | 543 - 514 | |
| AmpR_promoter | 2556 - 2528 | |
| M13_pUC_rev_primer | 500 - 478 | |
| M13_reverse_primer | 479 - 461 | |
| M13_forward20_primer | 379 - 395 | |
| M13_pUC_fwd_primer | 364 - 386 | |
| lacZ_a | 398 - 250 | |
| pGEX_3_primer | 51 - 29 | |
| Orf2 | 2486 - 1626 |
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
設(shè)計(jì)引物：
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位點(diǎn)GGATCC及三個(gè)保護(hù)堿基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位點(diǎn)GAATTC及三個(gè)保護(hù)堿基)
請(qǐng)查一下NOS終止子序列內(nèi)有沒(méi)有這兩個(gè)酶切點(diǎn)。如果沒(méi)有，引物合成后，以任何一種pCAMBIA為模板都能擴(kuò)增到該終止子序列。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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