(一)石蠟切片注意事項(xiàng)
(1)組織脫水、透明和浸蠟 在脫水過程中，所用各級(jí)酒精的純度應(yīng)盡量保持，以便將組織內(nèi)的水分徹底脫去。在無水酒精中的時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以防組織過硬，造成切片不順暢。如果無水酒精中含有水分，則組織脫水不徹底。這種含有水分的組織二甲苯不能完全浸入，造成切片無法透明而呈現(xiàn)混濁現(xiàn)象。此時(shí)可將組織重行在新無水酒精中脫水。透明所用二甲苯應(yīng)保持純度，否則透明難以充分，不利于石蠟滲透。組織在二甲苯中的時(shí)間需要嚴(yán)格掌握，時(shí)間過長(zhǎng)則組織脆硬易碎，時(shí)間過短石蠟不易浸入。因?yàn)橥该魉钑r(shí)間較短，所以透明時(shí)間必須注意。浸蠟的溫度不可以過高，一般應(yīng)調(diào)節(jié)在54～56℃。溫度過高時(shí)會(huì)使組織變脆。浸蠟時(shí)間應(yīng)適當(dāng)嚴(yán)格控制。
(2)包埋 石蠟溫度不可過高，以防燙傷組織。所用鑷子也不可燒得過燙，以免在取組織時(shí)灼傷組織，造成切片制成后的不良后果。包埋時(shí)應(yīng)根據(jù)觀察需要而選擇組織塊擺放方向。
(3)石蠟切片 切片刀要鋒利，否則切片時(shí)會(huì)自行卷起，導(dǎo)致不能順利將切片切成連續(xù)的條帶狀。切片刀如有缺口存在，切片會(huì)斷裂、破碎和不完整。切片機(jī)各個(gè)零件和螺絲應(yīng)旋緊，否則產(chǎn)生震動(dòng)可導(dǎo)致切片厚薄不均。在搖動(dòng)切片機(jī)時(shí)用力要均勻，避免震動(dòng)。遇有較硬的腦、肝臟、脾臟等組織時(shí)，應(yīng)輕搖切片，以防組織由于震動(dòng)而形成空洞現(xiàn)象。切片刀放置角度以200～300為好。過大則切片上卷，不能連接一起，過小則切片皺起。
(二)染色時(shí)注意事項(xiàng)
(1)作為染料的溶媒主要是蒸餾水和酒精，以蒸餾水為多。采用濃度較稀的
染色液時(shí)，組織切片要經(jīng)過較長(zhǎng)時(shí)間的浸染才可以得到滿意的染色效果。如果組織切片不易著色，可采用濃度較高的染色劑。染色劑pH與染色作用關(guān)系密切。染液或試劑有沉淀，用前應(yīng)過濾。
(2)組織切片的脫蠟應(yīng)徹底，否則染色效果不好，染色時(shí)間的長(zhǎng)短需根據(jù)染色液對(duì)組織的染色作用、染色時(shí)的室溫條件、切片的厚薄、固定液的類別以及染色液的新舊等有所變異，染色時(shí)可使用顯微鏡觀察染色程度。一般增高溫度可促進(jìn)染色，冬季室溫低時(shí)需加溫。
(3)分化是染色成敗的關(guān)鍵。分化不當(dāng)會(huì)引起染色不均、過淡或過深等現(xiàn)象。因此有必要在顯微鏡下觀察來進(jìn)行控制。組織切片脫水、透明等步驟必須徹底，否則切片呈云霧狀。
(4)組織切片封固時(shí)，應(yīng)注意中性樹膠的濃度，以能滴下成珠為好，如果過稀則易于溢出蓋玻片，而且二甲苯揮發(fā)后的組織切片會(huì)因樹膠收縮而產(chǎn)生氣泡；如果過濃則在加上蓋玻片后，樹膠不易散開，出現(xiàn)氣泡時(shí)不易除去。
封固組織切片時(shí)，切片上可剩余適量二甲苯，過多或過少均可引起封固時(shí)產(chǎn)生氣泡。若切片見有少數(shù)氣泡時(shí)，可用眼科小鑷子輕壓消除。樹膠封固時(shí)要注意避免口、鼻呼出氣體接觸到載玻片，否則切片呈云霧狀。在潮濕的環(huán)境里，封固動(dòng)作必須快速。樹膠不要滴得過多，以免溢出蓋玻片，但太少又不能到達(dá)蓋玻片邊緣。
(5)組織切片在染色前應(yīng)遮蓋保存，以防灰塵落入。染后的切片應(yīng)妥善保存，避免日光照射而褪色。在染色過程中，組織切片偶有脫離玻片現(xiàn)象，原因如下：載玻片不清潔；附片時(shí)的水溫過低；烤片時(shí)間不足或烤片溫度不夠而急于染色；組織塊脫水不好，影響后續(xù)的浸蠟和切片過程；組織過干或過硬，難切成片；浸蠟時(shí)間過長(zhǎng)可致組織硬脆。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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