技術(shù)文獻(xiàn)
人體細(xì)胞在凋亡的過程中，DNA斷裂并分泌至細(xì)胞外。健康細(xì)胞，胎兒細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞以及移植的細(xì)胞都可以通過這種方式釋放游離DNA至血液中。同時(shí)cfDNA(cell-free DNA) 是腫瘤和產(chǎn)前診斷研究中，被證實(shí)有用的標(biāo)記物。
隨著液體活檢技術(shù)的不斷發(fā)展，對(duì)這些的游離核酸檢測(cè)有望成為替代組織活檢的重要方法。大家比較熟悉的游離核酸檢測(cè)手段有定量PCR、NGS等傳統(tǒng)方法和正在迅猛發(fā)展的數(shù)字PCR。
但cfDNA在體液中的含量非常低，通常血清中含量低于10ng/mL。 如何從含量如此低的樣本中，抽提出適合檢測(cè)手段的游離核酸？
液體活檢技術(shù)的興起，使得游離核酸樣本的數(shù)量大增，高通量形式的核酸抽提成為了工作者們的追求，如何低成本解決通量問題？
那就從下方的描述中找到適合您的游離核酸抽提方式吧。
市面上的游離核酸抽提試劑盒大多是基于柱膜法的原理、還有一部分是基于磁珠法的抽提原理。有單管離心、多管真空抽濾、96孔板真空抽濾、磁珠法高通量等形式。*常用的為多管真空抽濾的方式。
多管真空抽濾
采用真空抽濾的方法，在真空抽濾裝置上，可同時(shí)提取24個(gè)1-10mL血清、血漿、尿液等樣本, 結(jié)合&洗滌過程無(wú)需使用離心機(jī)。大多客戶用此方法來(lái)抽提2-4mL血漿，得到的游離核酸用于后續(xù)的PCR、NGS、甲基化研究。整個(gè)抽提過程需要約45min-3h不等，具體的操作時(shí)間要根據(jù)使用的品牌來(lái)定。
應(yīng)用數(shù)據(jù)：
從5mL EDTA血漿中純化cfDNA
NucleoSnap® DNA Plasma kit 和競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手(Competitor Q)比較結(jié)果
從Cell-Free DNA BCT® (Streck)提取cfDNA
3個(gè)不同Cell-free DNA BCT® 保存的樣品，分別使用 NucleoSnap® DNA Plasma (MN) 和a vacuum-processed kit of a competitor (Q)提取cfDNA.使用Bioanalyzer™ 2100 with a High Sensitivity DNA Kit (Agilent)檢測(cè)，分離到的游離核酸在170bp附近有典型的峰（箭頭標(biāo)記）
10mL尿液中分離cfDNA電泳圖
抽提的cfDNA使用 Bioanalyzer™ 2100 with a High Sensitivity DNA Kit (Agilent)分析，在170bp附近有典型的片段分布
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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