如何評(píng)價(jià)和選擇支原體檢測試劑盒_技術(shù)文章

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如何評(píng)價(jià)和選擇支原體檢測試劑盒
閱讀次數(shù)：649 發(fā)布時(shí)間：2020/9/3 9:24:59

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要選一款合適的支原體檢測試劑盒，有如下幾個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)：

1. 靈敏度。

靈敏度常用支原體基因組的拷貝數(shù)或支原體菌株的CFU表示。

2. 特異性和廣譜性。

質(zhì)量好的試劑盒應(yīng)檢測的支原體物種越多越多，并且特異性強(qiáng)，即只針對(duì)支原體，不針對(duì)其他細(xì)菌等微生物，沒有交叉反應(yīng)。

3. 穩(wěn)定性。

凍干粉比液體試劑的穩(wěn)定性高。

4. 樣本類型及樣本處理。

一款好的試劑盒，會(huì)標(biāo)出它適合的樣本類型，也會(huì)說明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)，因此需要處理。

5. 對(duì)照品。

一個(gè)好的試劑盒，會(huì)帶有陽性對(duì)照和內(nèi)控對(duì)照。內(nèi)控對(duì)照是用于監(jiān)測PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì)，則內(nèi)控對(duì)照的條帶會(huì)發(fā)生缺失。有嚴(yán)重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對(duì)內(nèi)控對(duì)照產(chǎn)生了競爭性抑制，因此支原體條帶越強(qiáng)，內(nèi)控條帶越弱（下圖）。

圖. 1. 100 bp DNA Ladder；2. 陰性對(duì)照，有內(nèi)控條帶；3. 陽性對(duì)照，有支原體陽性條帶；4. 樣本有PCR抑制劑；5.陰性樣本；6.陽性樣本，支原體污染較輕；7.陽性樣本，支原體污染較重。

但支原體核酸檢測法（NAT）并沒有載入我國藥典。我們藥典指定的是支原體培養(yǎng)法和DNA染色法。但2018年《中國藥事》第8期上，中國食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測方法及方法學(xué)驗(yàn)證的思考》，提出提出要與接軌，逐漸推進(jìn)NAT的開展，因其“具有快速、靈敏、便捷等特點(diǎn)”。

歐洲藥典規(guī)定，核酸法如替代培養(yǎng)基，核酸法的靈敏度需達(dá)到10 CFU·mL-1；如替代DNA染色法，核酸法的靈敏度需達(dá)到100 CFU·mL-1。該文也提出，需對(duì)NAT進(jìn)行特異性、檢出限和耐用性的驗(yàn)證。

因此，對(duì)于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細(xì)胞治療產(chǎn)品企業(yè)，可選擇試劑盒已經(jīng)驗(yàn)證并提供有參比物質(zhì)的知名品牌廠家，盡管后續(xù)仍需按照待測樣本類型進(jìn)行方法的適用性驗(yàn)證，并同步開展藥典方法的平行檢測研究，但已為NAT法檢查支原體帶來極大的方便。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司