PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染，pcr實驗室在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。
PCR實驗室的污染來源
1、樣本間交叉污染：
收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。
2、實驗試劑污染：
主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。 加樣過程中，因為 PCR 試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得 PCR 試劑和 PCR 板/管處于 0℃，但這個過程也是充滿了污染的風險的。
3、擴增產(chǎn)物污染：
大量拷貝的產(chǎn)物泄漏或擴增后的PCR反應(yīng)管意外開蓋，這是 PCR 反應(yīng)中*主要*常見的污染問題。因為 PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠遠高于 PCR 檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。
4、克隆
質(zhì)粒污染：
作為陽性質(zhì)控品的克隆質(zhì)粒外溢。
要避免污染，首先應(yīng)是預(yù)防，工作區(qū)域的嚴格劃分，各個實驗區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)，以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。實驗室分為內(nèi)廊、緩沖區(qū)、污染區(qū)，檢驗人員在緩沖區(qū)穿上防護服等裝備，全副武裝后分別進入到試劑準備區(qū)，標本制備區(qū)，擴增產(chǎn)物分析區(qū)。檢驗人員不可以將任何物品帶進實驗區(qū)。
檢驗人員在試劑準備區(qū)準備試劑，這里是實驗的開始。試劑準備完成后，通過傳遞窗傳送到標本制備區(qū)，在這里檢驗人員將標本和試劑混合好后，再通過傳遞窗傳送到擴增產(chǎn)物分析區(qū)。在這個區(qū)域，檢驗人員將得到*終的核酸檢測結(jié)果。
合理的系統(tǒng)設(shè)置，合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
規(guī)范的操作，臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓，在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。
嚴格的管理:嚴格控制進出實驗室的人員。在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服(如不同顏色)，當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。擴增產(chǎn)物分析區(qū)是*主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等.
Pcr實驗室消毒用什么？
過氧化氫超強的氧化能力可以破壞微生物體內(nèi)的原生質(zhì)，殺滅微生物，殺菌譜很廣，不僅可以殺滅細菌繁殖體和真菌，對細菌芽孢也有很好的殺滅作用，同時過氧化氫是一種清潔的化工產(chǎn)品，幾乎沒有任何污染。使用過氧化氫霧化不僅可以同時完成微生物實驗室內(nèi)空氣和實驗室內(nèi)不同物體表面、以及不易看到的污染死角的消毒，而且消毒徹底、消毒效果好，因此干霧化過氧化氫可以作為pcr微生物實驗室徹底消毒的一種方法進行使用。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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