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技術(shù)文獻(xiàn)

無(wú)外泌體血清制備操作步驟!
閱讀次數(shù):479 發(fā)布時(shí)間:2020/10/20 9:25:05
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  以外泌體為代表的細(xì)胞外囊泡是近幾年研究的熱點(diǎn),目前的外泌體研究主要通過(guò)研究體外培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的外泌體,分析其在體內(nèi)外的功能作用。一般的血清FBS中含有供體細(xì)胞自然分泌的大量Exosomes,而用于Exosome研究的細(xì)胞必須提前更換無(wú)外泌體的血清進(jìn)行培養(yǎng),以減少對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的污染。

目前市面上存在著商業(yè)化的無(wú)外泌體血清,然而由于其價(jià)格較高等因素,很多研究者選擇自己制備無(wú)外泌體血清,而常用的主要是基于超速離心的無(wú)外泌體血清分離方法

無(wú)外泌體血清制備步驟:

1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管。

2. 在超凈工作臺(tái),將普通血清置于超離管中,配平后,進(jìn)行熱封口。

3. 將封口后的超離管放于離心機(jī)轉(zhuǎn)子中,并加入相應(yīng)適配器然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋。

4. 設(shè)置離心程序:4℃,120,000 ×g,離心18小時(shí)(也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時(shí)【2】)。

5. 離心結(jié)束后,回收上清液,為避免污染,在超凈工作臺(tái)操作。

6. 收集得到無(wú)外泌體血清,并儲(chǔ)存于-20℃中備用。

無(wú)外泌體血清產(chǎn)品特點(diǎn):

1、專為外泌體研究而設(shè)計(jì);

2、無(wú)菌采集的健康胎牛血清過(guò)濾法去除外泌體;

3、胎牛血清內(nèi)源外泌體去除率達(dá)97%;

4、過(guò)濾法可有效保護(hù)FBS中重要的細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子;

5、培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)速率與形態(tài)與普通FBS無(wú)差異。

無(wú)外泌體血清是一種可由多種細(xì)胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn),無(wú)外泌體血清其內(nèi)含有獨(dú)特的蛋白質(zhì)與核酸分子,無(wú)外泌體血清所含成份與其細(xì)胞來(lái)源密切相關(guān),這也決定了無(wú)外泌體血清的功能特異性,如抗原提呈、信號(hào)傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、細(xì)胞間通信、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前,無(wú)外泌體血清研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點(diǎn)。

無(wú)外泌體血清關(guān)注市場(chǎng)的動(dòng)向,才可以更好的服務(wù)市場(chǎng),在不斷的挑戰(zhàn)中,追尋夢(mèng)想,實(shí)現(xiàn)自己的價(jià)值。無(wú)外泌體血清發(fā)揮了自己的實(shí)力,挑戰(zhàn)自己,追求的道路上,無(wú)外泌體血清更多的是堅(jiān)持不懈的努力,奮發(fā)向上的積極。無(wú)外泌體血清簡(jiǎn)便可靠。專業(yè)化知識(shí)強(qiáng),讓無(wú)外泌體血清的努力更好的得到了展現(xiàn),也是在新的時(shí)代里,無(wú)外泌體血清的付出是值得稱贊的。

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