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技術(shù)文獻(xiàn)

牛血清白蛋白的提取方法及用途
閱讀次數(shù):1045 發(fā)布時(shí)間:2021/3/4 9:52:49
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CAS:9048-46-8,又稱第五組分,牛血清白蛋白(BSA),是種常用的PCR擴(kuò)增增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑,能夠起到穩(wěn)定擴(kuò)增酶、降低PCR抑制物的作用,常見(jiàn)于核酸檢測(cè)試劑中,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)諸多學(xué)科及醫(yī)、藥學(xué)各域。


牛血清白蛋白(BSA)在動(dòng)物細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)中,起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在western blot和制備ELISA板中的封閉試劑。牛血清白蛋白(BSA)在生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究,般作為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,也可用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品。

牛血清中白蛋白(BSA)的制備方法很多,包括鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法和熱激法提取等,但目的制備方法所得的牛血清白蛋白(BSA)收率或純度都比較低,存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及內(nèi)毒素等雜質(zhì),限制了牛血清白蛋白(BSA)的進(jìn)步應(yīng)用,因此,種高純度從牛血清中分離白蛋白的方法十分關(guān)鍵。

利CN105017412B公開(kāi)的制備牛血清白蛋白(BSA)的方法,克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足,能夠從牛血中提取出高純度、高收率的牛血清白蛋白(BSA),且不含小分子物質(zhì)以及只含較低濃度的內(nèi)毒素。包括以下步驟:

先向牛血清中加入生理鹽水或PBS溶液將牛血清稀釋;再向稀釋后的牛血清中加入適量硫酸銨,2~8℃靜置30min以上,離心收集上清液;

第二步,向上清液中加入2~3倍體積的PBS溶液,混勻后進(jìn)行疏水層析,使用PBS溶液洗脫,收集洗脫液;

第三步,將洗脫液進(jìn)行分子篩層析,收集不含鹽和其它小分子的蛋白峰;所述層析填料為G10-G75葡聚糖;

第四步,使用陰離子交換層析進(jìn)步純化牛血清白蛋白(BSA),通過(guò)0.1~1.5M濃度氯化鈉進(jìn)行梯度洗脫,收集精純的牛血清白蛋白(BSA);

后,經(jīng)過(guò)對(duì)病原微生物進(jìn)行滅活、分子篩層析、超濾濃縮、過(guò)濾除菌得到純度高于99.5%的牛血清白蛋白(BSA)。

這種方法大程度地去除血漿中的雜質(zhì),有效提高了牛血清白蛋白(BSA)的純度,對(duì)于其在生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究的應(yīng)用具有重要價(jià)值。

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