熒光定量PCR(qPCR)使用方法_技術(shù)文章_上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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熒光定量PCR(qPCR)使用方法
閱讀次數(shù)：692 發(fā)布時間：2021/4/25 9:36:25

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熒光定量PCR法（qPCR）：是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記，使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光，利用熒光信號的變化和配套軟件，進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時監(jiān)測，簡稱qPCR。

（經(jīng)典法）
1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報和質(zhì)檢。
2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。
3) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。

支原體熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒（步法）
1）適合科研單位檢測，或單位內(nèi)檢，用熒光定量PCR(qPCR)法檢測細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。
2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了步，（將內(nèi)控對照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中），操作更簡潔。
3)樣本量為2μl，靈敏度為50個基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。

優(yōu)點(diǎn)：
①靈敏度高、特異性強(qiáng)。
②時間短，2-3小時出結(jié)果。
③檢測結(jié)果可定量。
④操作簡便。

缺點(diǎn)：
①對于已做支原體滅活處理的樣品，由于支原體DNA仍舊存在其中，PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。（可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證）
②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大（由于引物及內(nèi)在設(shè)計不同），需謹(jǐn)慎選擇，盡量在業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司