重組
蛋白表達技術(shù)可以用來分析基因調(diào)控以及研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能。無論是體內(nèi)功能研究還是用于結(jié)構(gòu)研究的大規(guī)模生產(chǎn)，以及生物治療域的藥物開發(fā)都需要用到蛋白表達技術(shù)。
1、蛋白質(zhì)通用合成路徑
DNA —>mRNA—> 蛋白
實際操作流程為：
1. 克隆或合成目的基因
2. 載體構(gòu)建
3. 蛋白表達與純化
4. 蛋白的大量表達與純化（或無）
2、克隆或合成目的基因
典型的表達載體包括至少4個主要元件：
目的基因表達框（包括啟動子和基因終止或 poly (A) 信號）
細菌的復(fù)制起始點（ori）
特定宿主的抗生素選擇框（如潮霉素 B、霉酚酸、嘌呤霉素、殺稻瘟菌素 S 等）
大腸桿菌的抗生素選擇框（如氨芐青霉素、殺稻瘟菌素 S、羧芐青霉素、Zeocin 選擇性抗生素抗性等）
其他元件還包括：
多克隆位點（MCS）（即多酶切接頭）
表位標(biāo)簽
分泌信號
蛋白酶識別位點
內(nèi)部核糖體插入位點（IRES）
3、不同蛋白表達系統(tǒng)選擇
蛋白表達是許多小伙伴的實驗課題中的主要內(nèi)容。由于涉及不同的研究域，表達載體多種多樣，每個人要表達的蛋白特性更是千差萬別，特別是些小伙伴是第次做課題，關(guān)于怎樣表達蛋白，怎樣安排實驗步驟更是頭霧水。這里按照不同表達載體，列舉常用的重組蛋白表達方案。對每種蛋白表達案例從實驗步驟、大只需用時間以及每個步驟需要完成的目標(biāo)進行比較，大家可以對照自己的實驗內(nèi)容，希望能有所幫助。
4、常用的蛋白表達（含細胞株的制備）：
CHO 穩(wěn)定細胞株開發(fā)
HEK293 穩(wěn)定細胞株開發(fā)
原核蛋白表達
哺乳動物細胞瞬時表達
酵母蛋白表達
桿狀病毒與
昆蟲細胞蛋白表達
5、重組蛋白技術(shù)方案
1. CHO 穩(wěn)定細胞株開發(fā)
2. HEK293 穩(wěn)定細胞株開發(fā)
3. 原核蛋白表達流程
4. 哺乳動物細胞瞬時表達流程
5. 酵母蛋白表達流程
6. 桿狀病毒 - 昆蟲細胞蛋白表達流程
6、不同蛋白表達之比較
以上實驗方案的完成時間是較為成熟的實驗室的工作流程用時，小伙伴可以根據(jù)自己的實驗安排靈活掌握。完成目標(biāo)也應(yīng)該根據(jù)自己的課題要求進行適當(dāng)增減。
原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司
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