細胞株培養(yǎng)過程中常見問題解決_技術(shù)文章

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細胞株培養(yǎng)過程中常見問題解決
閱讀次數(shù)：70 發(fā)布時間：2024/3/22 10:04:38

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細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。然而，細胞株在體外培養(yǎng)的過程中會出現(xiàn)一些問題，比如：細胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長，細胞株生長緩慢，細胞株死亡等。那么該如何解決呢？

一、細胞株無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長

1.細胞株胰酶消化過度：縮短胰酶消化時間或減少胰酶用量。

2.支原體污染：隔離細胞株，檢測是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細胞株被污染，滅菌處理后丟棄。

3.培養(yǎng)基中無附著因子：如果使用的是無血清配方，應(yīng)確保含有附著因子或者使用經(jīng)過包被的培養(yǎng)板。

二、細胞株生長緩慢

1.培養(yǎng)基或血清改變：比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異；增大細胞株初始接種密度；使細胞株逐步適應(yīng)新的培養(yǎng)基。

2.必需生長促進成分（如L-谷氨酰胺或生長因子）耗竭、缺乏或分解：去除原培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基；向培養(yǎng)基中添加生長促進成分（如L-谷氨酰胺）。

3.輕度細菌或真菌污染：在不添加抗生素的條件下進行培養(yǎng)，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。

4.時間存儲不當：血清應(yīng)于-5℃至-20℃下儲存；培養(yǎng)基應(yīng)于2℃~8℃下避光儲存；盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時間。

5.細胞株初始接種密度低：增大活細胞接種密度。

6.細胞株衰老、老化：將老化細胞丟棄，取用代數(shù)較少的細胞。

7.支原體污染：隔離細胞株，檢測是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。

三、培養(yǎng)基pH值變化迅速

1.培養(yǎng)箱CO2分壓設(shè)置錯誤：根據(jù)培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度增大或降低培養(yǎng)箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時，應(yīng)相應(yīng)地使用5%-10%的CO2分壓。

2.細胞培養(yǎng)瓶瓶蓋過緊：將瓶蓋旋松1/4圈。

3.碳酸氫鹽緩存系統(tǒng)緩沖能力不足：加入HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM。

4.培養(yǎng)基中鹽含量不正確：CO2平衡環(huán)境中使用以Earle平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基。

以上就是細胞株在培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的問題、原因以及解決方法，希望可以幫助大家在培養(yǎng)細胞株過程中遇到的困難，僅供參考。

5.細菌、酵母或真菌污染：將細胞和培養(yǎng)基滅菌處理后丟棄。

四、細胞株凋亡

1.培養(yǎng)箱中無CO2：監(jiān)測培養(yǎng)箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶；經(jīng)常檢測管路連接處是否漏氣；不要頻繁開啟培養(yǎng)箱門。

2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度有波動：監(jiān)測培養(yǎng)箱內(nèi)溫度，及時校正。

3.使用抗生素達到毒性濃度：減少抗生素的用量；使用無血清培養(yǎng)基時，抗生素濃度應(yīng)降低至1/10。

4.細胞株復(fù)蘇或凍存時受到損傷：取用新的細胞。

5.培養(yǎng)基的滲透壓不合適：檢查完/全培養(yǎng)基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，加入某些試劑和藥物后會影響培養(yǎng)基的滲透壓；昆蟲細胞培養(yǎng)基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動物細胞。

6.培養(yǎng)基中毒性代謝產(chǎn)物蓄積：去除原培養(yǎng)基，換用新鮮培養(yǎng)基。

五、懸浮細胞株集成團

1.存在鈣離子和鎂離子：用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞，輕輕吹打細胞，使其形成單細胞懸液。

2.支原體污染：隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。

3.蛋白水解酶消化過度導(dǎo)致細胞裂解、DNA釋放：用0.001%DNA酶I處理細胞；用PBS沖洗后再接種到新培養(yǎng)基中。