單克隆
抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體各有其優(yōu)點(diǎn)和局限性，只有對(duì)它們有全/面的了解，才能根據(jù)不同應(yīng)用域的要求，正確的選擇和應(yīng)用。
一、單克隆抗體
單克隆抗體的定義:
單克隆抗體是僅與目標(biāo)蛋白某一特定表位結(jié)合的單一抗體。
單克隆抗體的制備：
簡(jiǎn)單來說就是將免疫原注射到宿主動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，之后把 B 細(xì)胞從脾臟中移出，單種 B 細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合為 B 細(xì)胞雜交瘤，成為一個(gè)永生化胞株。這樣一來，雜交瘤的 B 細(xì)胞就會(huì)一直產(chǎn)出只識(shí)別單一表位的單克隆抗體，通常這個(gè)胞株會(huì)有一個(gè)特定的克隆號(hào)（clone number），用來與其他胞株區(qū)分。雜交瘤接下來可以被注射到小鼠的腹腔中大量生產(chǎn)，雜交瘤分泌富含抗體的一種液體，被稱作腹水，用注射器抽取純化，就可獲得大量的單克隆抗體。
單克隆抗體更適用于:
1、檢測(cè)單一抗原
2、檢測(cè)蛋白質(zhì)家族的單一成員
3、不同實(shí)驗(yàn)/批次的抗體檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定一致
4、細(xì)胞染色背景較低-很適用于 IHC、ICC、IF 等應(yīng)用
5、量化蛋白質(zhì)表達(dá) (例：流式或熒光細(xì)胞分選)
6、探測(cè)分子結(jié)構(gòu)變化
7、探測(cè)磷酸化狀態(tài)的變化
8、為 X 射線晶體測(cè)試探測(cè)目標(biāo)
9、制作缺少特定細(xì)胞類型的動(dòng)物模型
10、免疫治療
單克隆抗體不建議用于:
1、根據(jù)同源性檢測(cè)不同物種的目標(biāo)蛋白
2、檢測(cè)濃度較低的目標(biāo)蛋白
3、檢測(cè)形態(tài)變化了的蛋白
二、多克隆抗體
多克隆抗體定義
多克隆抗體是指與目標(biāo)蛋白上多種不同表位結(jié)合的多種不同抗體.
多克隆抗體制備
多克隆抗體的第1步和單克隆抗體一樣，都是將免疫原注射到宿主體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，激活了多種B細(xì)胞。不同的是免疫過后，多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來，或接著進(jìn)行純化，沒有與骨髓瘤細(xì)胞融合的過程。一旦宿主動(dòng)物死亡，需要免疫新的動(dòng)物，這時(shí)血清中的抗體就會(huì)有所不同。雖然多抗每批次有輕微差別，但是因?yàn)樗R(shí)別的表位多，這個(gè)差別影響并不算太大，而單克隆抗體雖然價(jià)格偏高，可是特異性更強(qiáng)更穩(wěn)定。可以說單抗和多抗是各有各的優(yōu)點(diǎn)。
多克隆抗體更適用于:
1、檢測(cè)有高同源性的抗原的已知或未知同種型
2、檢測(cè)濃度較低的抗原
3、捕獲盡可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)
4、檢測(cè)變性的蛋白
5、檢測(cè)可能發(fā)生了糖基化或形態(tài)變化的目標(biāo)蛋白
6、用多種檢測(cè)方法檢測(cè)一種原蛋白時(shí)
7、檢測(cè) pH 和鹽度不同的溶液中的目標(biāo)蛋白
多克隆抗體不建議用于:
1、量化檢測(cè)，比如：流式。由于不同表位的結(jié)合導(dǎo)致信號(hào)被放大加強(qiáng)，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確
2、當(dāng)高同源性蛋白的交叉反應(yīng)會(huì)引起問題時(shí)
三、多克隆抗體和單克隆抗體的用途
1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個(gè)關(guān)鍵特征涉及它們各自對(duì)抗原的特異性和靈敏度。
2、抗體的特異性是由其結(jié)合域和目標(biāo)抗原之間的相對(duì)親和力決定的，而其他分子是存在的。對(duì)這種特異性的利用對(duì)免疫學(xué)研究人員和臨床醫(yī)生來說是至關(guān)重要的，因?yàn)樵S多應(yīng)用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來門檢測(cè)目標(biāo)分子。結(jié)合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個(gè)重要的參數(shù)，決定了它在實(shí)驗(yàn)室的實(shí)用性。
3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應(yīng)用，如免疫沉淀、West Blot 和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），因?yàn)樗鼈兡軌蜃R(shí)別低水平的目標(biāo)抗原。
免疫沉淀是一種分析技術(shù)，通過使用特異性結(jié)合抗原的抗體將抗原從混合物中分離出來。然后用固定化抗體或磁珠對(duì)產(chǎn)生的抗原-抗體復(fù)合物進(jìn)行進(jìn)一步處理，從而使抗原-抗體復(fù)合物在分析從混合物中分離出來。
4、與免疫沉淀法一樣，ELISA 可以使用多克隆或單克隆抗體來檢測(cè)溶液中的目標(biāo)抗原。
5、間接和夾心 ELISA 是兩種免疫測(cè)定形式，在整個(gè)過程中使用兩種類型的抗體：?jiǎn)慰寺】贵w由于對(duì)目標(biāo)抗原的高特異性，通常先應(yīng)用（一）；多克隆抗體由于能夠以高靈敏度放大低信號(hào)，因此作為二試劑更有用。
6、除了 ELISA，抗體對(duì)于免疫組化和流式細(xì)胞儀等檢測(cè)技術(shù)也很有用，因?yàn)樗鼈兛梢砸愿叻直媛蕶z測(cè)復(fù)雜組織或細(xì)胞內(nèi)的抗體-抗原構(gòu)建。
生產(chǎn)企業(yè)對(duì)抗體特異性和靈敏度的確認(rèn)使得像 ELISAs 這樣的免疫測(cè)定可以根據(jù)抗原和抗體的使用方式而采取不同的形式，這使得這些測(cè)試具有高度的通用性。例如，一種免疫測(cè)定需要高度敏感的測(cè)試來檢測(cè)一種未知的病原體，由于多克隆抗體能夠識(shí)別一種抗原上的多個(gè)表位，因此會(huì)從多克隆抗體中獲益。如果一個(gè)病原體或抗原先已經(jīng)被定性，那么在下游應(yīng)用中使用單克隆抗體來進(jìn)一步定性可能更合適。
7、在實(shí)驗(yàn)室外，抗體可以被用來增強(qiáng)、模仿或恢復(fù)免疫系統(tǒng)攻擊疾病目標(biāo)的能力。除了一些例外，單克隆抗體比多克隆抗體更適合于治療目的，因?yàn)樗鼈兙哂型|(zhì)性，對(duì)單一表位的高特異性和低程度的交叉反應(yīng)。
8、這些特性對(duì)于有效的癌癥治療特別重要，因?yàn)槟[瘤細(xì)胞能夠逃避或阻斷免疫系統(tǒng)。單克隆抗體療法對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮作用的一些方式包括涉及直接結(jié)合以誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的機(jī)制和阻斷腫瘤生長(zhǎng)因子和血液供應(yīng)的間接機(jī)制。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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