泛素化的定義過程和檢測方法_技術(shù)文章_上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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泛素化的定義過程和檢測方法
閱讀次數(shù)：10 發(fā)布時間：2025/3/19 9:44:36

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泛素化（Ubiquitination）‌是一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾過程，涉及泛素分子在一系列酶的作用下共價結(jié)合到靶蛋白上。泛素化在細(xì)胞內(nèi)具有多種功能，包括蛋白質(zhì)降解、信號傳導(dǎo)、DNA修復(fù)和細(xì)胞周期調(diào)控等。‌

定義和過程

泛素化是指泛素分子在一系列酶的作用下共價結(jié)合到靶蛋白上的過程。這個過程涉及三種關(guān)鍵酶：E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶和E3泛素連接酶。先，E1在ATP供能下激活泛素分子，然后將其轉(zhuǎn)移到E2上，后E3識別并結(jié)合特定的底物蛋白，催化泛素從E2轉(zhuǎn)移到底物蛋白的賴氨酸殘基上，形成異肽鍵，完成泛素化修飾。

生物學(xué)功能

泛素化在細(xì)胞內(nèi)具有多種功能：

‌蛋白質(zhì)降解‌：通過蛋白酶體途徑降解異�；蚨嘤嗟牡鞍踪|(zhì)，維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。

‌信號傳導(dǎo)‌：參與多種細(xì)胞信號通路的調(diào)節(jié)，如NF-κB信號通路等。

‌DNA修復(fù)‌：在DNA損傷時，通過泛素化修飾相關(guān)蛋白來啟動DNA修復(fù)機(jī)制。

細(xì)胞周期調(diào)控‌：影響細(xì)胞周期的進(jìn)程，確保細(xì)胞的正常分裂和增殖。

檢測方法

檢測蛋白是否泛素化的方法包括：

‌免疫沉淀結(jié)合Western Blot分析‌：通過免疫共沉淀的方法將特定蛋白及其結(jié)合的其他蛋白分離出來，進(jìn)行SDS電泳和Western Blot分析。

‌Western Blot結(jié)合膜剝離技術(shù)‌：通過Western Blot分析所有可能的泛素化蛋白條帶，并進(jìn)行膜剝離處理。

體外泛素化結(jié)合檢測‌：將目標(biāo)蛋白基因轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，通過大量表達(dá)和提純目的蛋白進(jìn)行分析。

體外泛素化反應(yīng)分析‌：將目的基因轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，使其大量表達(dá)，然后進(jìn)行免疫沉淀和Western Blot分析。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司