技術(shù)文獻(xiàn)
定義：在一個(gè)凝膠電泳系統(tǒng)中不同部位的pH、離子強(qiáng)度、緩沖液成分或凝膠孔隙大小不同的凝膠電泳。其目的在于提高電泳分離的范圍和分辨率。
不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳包含了兩種以上的緩沖液成分、pH值和凝膠孔徑，而且在電泳過程中形成的電位梯度亦不均勻。由此產(chǎn)生的濃縮效應(yīng)、電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。
不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳基本原理
1．濃縮效應(yīng)樣品在電泳開始時(shí)，通過濃縮膠被濃縮成高濃度的樣品薄層(一般能濃縮幾百倍)，然后再被分離。當(dāng)通電后，在樣品膠和濃縮膠中，解離度大的Cl—有效遷移率大，被稱為快離子，解離度次之的蛋白質(zhì)則尾隨其后，解離度小的甘氨酸離子(PI=6．0)泳動(dòng)速度慢，被稱為慢離子。由于快離子的迅速移動(dòng)，在其后邊形成了低離子濃度區(qū)域，即低電導(dǎo)區(qū)。電導(dǎo)與電勢梯度成反比，因而可產(chǎn)生較高的電勢梯度。這種高電勢梯度使蛋白質(zhì)和慢離子在快離子后面加速移動(dòng)。因而在高電勢梯度和低電勢梯度之間形成一個(gè)迅速移動(dòng)的界面，由于樣品中蛋白質(zhì)的有效遷移率恰好介于快、慢離子之間，所以，也就聚集在這個(gè)移動(dòng)的界面附近，逐漸被濃縮，在到達(dá)小孔徑的分離膠時(shí)，已形成一薄層。
2．電荷效應(yīng)當(dāng)各種離子進(jìn)入pH8．9的小孔徑分離膠后，甘氨酸離子的電泳遷移率很快超過蛋白質(zhì)，高電勢梯度也隨之消失，在均一電勢梯度和pH的分離膠中，由于各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，所帶電荷量不同，在電場中所受引力亦不同，經(jīng)過一定時(shí)間電泳，各種蛋白質(zhì)就以一定順序排列成一條條蛋白質(zhì)區(qū)帶。
3．分子篩效應(yīng)由于分離膠的孔徑較小，分子量大小或分子形狀不同的蛋白質(zhì)通過分離膠時(shí)，所受阻滯的程度不同，因而；遷移率不同而被分離。此處分子篩效應(yīng)是指樣品通過一定孔徑的凝膠時(shí)，受阻滯的程度不同，小分子走在面，大分子走在后面，各種蛋白質(zhì)按分子大小順序排列成相應(yīng)的區(qū)帶。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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