細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)重要環(huán)節(jié)是選擇成分適合又營養(yǎng)豐富的細(xì)胞
培養(yǎng)基。這其中以經(jīng)典培養(yǎng)基添加5~10%的
牛血清*為常用，它能維持細(xì)胞活力，促進(jìn)細(xì)胞增殖。
牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中提供細(xì)胞生長和增殖所需的生長因子、激素、
蛋白、粘附和鋪展因子和其他多種營養(yǎng)物質(zhì)。
下面列出牛血清儲(chǔ)存、分裝、解凍要點(diǎn)，以供初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)的新手或?qū)嶒?yàn)人員參考，以促進(jìn)試劑的合理應(yīng)用和細(xì)胞的順利培養(yǎng)。
一、儲(chǔ)存
要保證牛血清質(zhì)量，牛血清必須貯于-20℃。不能長期存放于4℃和室溫，否則影響血清品質(zhì)。同時(shí)避免血清的反復(fù)凍融。
二、分裝
如果1次無法用完1瓶血清，可將血清40~45mL分裝于無菌的50mL離心管中，每次依用量取出。由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10％ ，裝管時(shí)必須預(yù)留此膨脹體積之空問，否則易發(fā)生血清擠出容器發(fā)生污染，或容器凍裂。
三、解凍
要解凍使用血清時(shí)，應(yīng)使用逐步解凍法，才不會(huì)使血清質(zhì)量受損。具體解凍方法見下表，該方法系締一生物與專家總結(jié)而成，可限度地保留因子活性，非常重要。
不同容積血清（100ml，500ml，1L）使用不同的融化方案，全程只需要大約2.5個(gè)小時(shí)。
需要嚴(yán)格按照三步法操作。如無法保證20℃水浴，也可用接近此溫度的自來水。
在融化過程中要慢慢搖動(dòng)，使血清混勻，但不要產(chǎn)生泡沫！
在解凍過程中必須注意的是，水浴時(shí)血清的平面要完全浸在水中。要一直規(guī)則均勻搖晃(小心勿造成氣泡，不要產(chǎn)生泡沫，否則有損質(zhì)量)，使溫度與成分始終均一。勿直接由-20℃放至37℃快速解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生大量沉淀。
一般不需要對胎牛血清進(jìn)行熱滅活。因胎牛血清中補(bǔ)體系統(tǒng)尚不完全，影響極小。熱滅活反而非常造成沉淀和導(dǎo)致部分因子失活。
以上意見希望能對你的實(shí)驗(yàn)帶來幫助。
客服一
