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霉菌平板計數(shù)法的樣品稀釋流程
閱讀次數(shù):597 發(fā)布時間:2021/7/16 10:06:54
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霉菌平板計數(shù)法的樣品稀釋分為固體,半固體,液體樣品三種狀態(tài),稀釋流程如下:

1.固體和半固體樣品:稱取25g樣品,加入225ml無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液),充分振搖,或用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。

2.液體樣品:以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL無菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)的適宜容器內(nèi)(可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)或無菌均質(zhì)袋中,充分振搖或用拍擊式均質(zhì)器拍打lmin~2min,制成1∶10的樣品勻液。

3.取1mL,1∶10樣品勻液注入含有9mL無菌稀釋液的試管中,另換一支1mI無菌吸管反復(fù)吹吸,或在旋渦混合器上混勻,此液為1∶100的樣品勻液。

4.按3操作,制備10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1支lmL無菌吸管。

5.根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個無菌平皿內(nèi)。同時分別取lmL無菌稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。

6.及時將20mL~25mL冷卻至46℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂(可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養(yǎng)基完全凝固。

稀釋以后,開始培養(yǎng)瓊脂凝固后,正置平板,置28℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。
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