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微生物三點(diǎn)接種法了解一下!
閱讀次數(shù):527 發(fā)布時(shí)間:2021/9/16 10:32:03
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接種是微生物技術(shù)中基本的操作,接種技術(shù)在微生物的分離純化、生理生化等試驗(yàn)中都非常重要。由于接種的目的不同,所采用的接種方式也不同,接種可分成斜面接種、穿刺接種和三點(diǎn)接種等。選擇正確的接種方法,對(duì)于微生物的分離、純化、增殖和鑒別都有重要作用。因接種方法的不同,常常采用不同的接種工具,如接種環(huán)、接種針、移液管和涂布棒等。

在接種過程中,必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作無菌操作一般是在無菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行,并靠近煤氣燈(或酒精燈,一般用酒精噴燈)的火焰操作。有條件的也可在超凈工作臺(tái)上操作。


微生物三點(diǎn)接種法:三點(diǎn)接種是為了獲得單菌落所使用的方法,它是在培養(yǎng)皿上接種,即用接種針蘸取少量霉菌孢子,在澆有瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿(俗稱平板)上,以等邊三角形的三點(diǎn)輕輕點(diǎn)一點(diǎn),培養(yǎng)后即在此三點(diǎn)上長(zhǎng)出菌落。其優(yōu)點(diǎn)是:同種菌落有三個(gè)重復(fù),同時(shí)在菌落彼此相接近的邊緣常留有一條狹窄的空白地帶此處菌絲生長(zhǎng)稀疏,較透明,還分化出典型子實(shí)體,因此可以直接把培養(yǎng)皿放在低倍鏡下觀察,便于根據(jù)形態(tài)特點(diǎn)進(jìn)行菌種的鑒定。具體操作如下

步驟一,倒平板,將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基放在水浴鍋上加熱熔化,待冷卻至45℃(手握不覺太燙為宜)后,用無菌操作法倒平板。

步驟二,標(biāo)明三點(diǎn)位置,待平板凝固后,在培養(yǎng)皿底部注明菌種、日期等,并以等邊三角形的三個(gè)頂點(diǎn)標(biāo)上記號(hào)。

步驟三,右手拿接種針,先在火焰上燒紅滅菌并在平板培養(yǎng)基的邊緣冷卻且蘸濕。

步驟四,蘸取孢子,將滅過菌而且蘸濕的接種針伸入菌種管,用針尖蘸取少量霉菌孢子。

步驟五,點(diǎn)接,以垂直法或水平法把接種針上的孢子點(diǎn)到預(yù)先標(biāo)記好的部位,注意切勿刺破培養(yǎng)基。

將培養(yǎng)皿倒置,于28℃恒溫條件下培養(yǎng),48h后觀察生長(zhǎng)情況。

在接種的過程中需要注意哪些問題呢?

(1)接種室應(yīng)保持清潔,用煤粉酚皂液擦洗臺(tái)面及墻壁,定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用,均應(yīng)用紫外燈滅菌。定期對(duì)接種室作無菌程度的檢查。

(2)進(jìn)入接種室,應(yīng)先做好個(gè)人衛(wèi)生工作,在緩沖間內(nèi)要更換工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只準(zhǔn)在接種室內(nèi)使用。不準(zhǔn)穿到其它地方去,并要定期更換、消毒。

(3)接種的試管、三角并瓶等應(yīng)做好標(biāo)記,注明培養(yǎng)基、菌種的名稱、日期。移入接種室內(nèi)的所有物品,均須在緩沖室用70%酒精擦試干凈。

(4)接種,雙手用70%酒精或新潔爾消毒,操作過程不離開酒精燈火焰;棉塞不亂放;接種工具使用后均需火焰滅菌。

(5)恒溫培養(yǎng)箱應(yīng)經(jīng)常清潔消毒。
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