轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種門技術(shù)。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独�；化學介導(dǎo)方法中脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法較為常用；生物介導(dǎo)方法現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
什么是內(nèi)毒素？細菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖（LipopolySaccharide,LPS）和
蛋白的復(fù)合物，當細菌裂解時便會大量釋放出來。內(nèi)毒素單位為EU。
內(nèi)毒素對試驗的影響內(nèi)毒素存在大程度地影響轉(zhuǎn)染效率。同時內(nèi)毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應(yīng)，造成實驗中的假陽性。因此，為了保證高轉(zhuǎn)染率和轉(zhuǎn)染細胞高存活率，必須從質(zhì)粒制備的過程中將內(nèi)毒素去除。
內(nèi)毒素和質(zhì)粒的關(guān)系由于內(nèi)毒素兩親性和負電荷性，性質(zhì)類似于DNA，因此在質(zhì)粒純化中會伴隨質(zhì)粒一同被純化出來。質(zhì)粒中內(nèi)毒素含量的高低常用EU/?g質(zhì)粒表示。
按照EU/?g大小，質(zhì)粒被分為三個別：測序別（>50EU/?g）、轉(zhuǎn)染別(<50EU/?g)和無內(nèi)毒素別(<0.1EU/?g)。
內(nèi)毒素對于生物學應(yīng)用的影響
內(nèi)毒素會對原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞的DNA轉(zhuǎn)染過程造成重要影響，內(nèi)毒素水平的升高會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率的急劇下降。而且，使用不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA對于基因治療的相關(guān)應(yīng)用至關(guān)重要，因為內(nèi)毒素會導(dǎo)致發(fā)熱、內(nèi)毒素性休克綜合癥，并會在動物和人體上激活補體聯(lián)反應(yīng)。內(nèi)毒素也會干擾如巨噬細胞和B細胞一類免疫細胞的體外轉(zhuǎn)染實驗，導(dǎo)致免疫反應(yīng)的非特異性激活。這些效應(yīng)還包括對如IL-1和列腺素等免疫介質(zhì)的誘導(dǎo)性合成。為了避免對實驗結(jié)果的錯誤判斷，確保塑料制品、培養(yǎng)基、血清和質(zhì)粒DNA中均無LPS污染十分重要。
不同質(zhì)粒制備方法中的內(nèi)毒素污染內(nèi)毒素分子的化學結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，以及它們形成膠束結(jié)構(gòu)的傾向性，都使得它們?nèi)菀着c質(zhì)粒DNA共同被純化出來。例如，在CsCl超速離心法當中，CsCl結(jié)合的DNA很容易被內(nèi)毒素分子所污染，因為在CsCl中內(nèi)毒素與質(zhì)粒——溴化乙錠復(fù)合物具有相似的密度。
在大尺寸DNA純化樹脂上，高分子量膠束樣內(nèi)毒素很類似于高分子量的DNA分子；在陰離子交換色譜法當中，內(nèi)毒素分子上的負電荷能夠與陰離子交換樹脂相互作用，從而導(dǎo)致內(nèi)毒素與質(zhì)粒DNA被共同純化下來。不過，質(zhì)粒DNA中內(nèi)毒素污染的水平很大程度上依賴于所使用的純化方法。QIAGEN Plasmid Kit和2xCsCl梯度離心法均能夠生成較低內(nèi)毒素含量的高純度DNA。硅膠懸漿法純化出的DNA則含有顯著升高的內(nèi)毒素污染。使用EndoFree Plasmid Kit抽提出的DNA僅含有可忽略不計的微量內(nèi)毒素（<0.1EU /ug質(zhì)粒DNA）。
客服一
