過氧化物酶(POX)染色實驗方法
閱讀次數(shù)：418 發(fā)布時間：2023/4/24 10:49:23
實驗原理
血細胞中的過氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍黑色的顆粒，沉著于細胞質(zhì)中。
實驗方法
材料：
1.1%TMB
2.亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液
3.1%過氧化氫溶液
4.稀過氧化氫溶液
5.瑞氏染色液
6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等
方法：
1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10?l，溶液呈淡棕黃色。
2.在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml，放置lmin后，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色6min。
3.自來水沖洗，待干，瑞氏染液復染15～20min。
4.自來水沖洗，待干，油鏡鏡檢。
實驗結(jié)果計算
細胞質(zhì)內(nèi)有藍黑色顆粒者為陽性。
（－）無顆粒沉著；
（±）顆粒細小，分布稀疏；
（+）顆粒較粗，局灶分布；
（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；
（+++）顆粒粗大，呈團塊分布，幾乎布滿胞質(zhì)；
（++++）全部胞質(zhì)均布滿顆粒，可覆蓋胞核。
注意事項
1.血涂片和骨髓片應(yīng)該新鮮制作，涂片應(yīng)該厚薄適宜；
2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果較好，勿用90%~95%乙醇，否則細胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而導致染色效果差；
3.H2O2需新鮮配置，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細胞看不見顆粒，紅細胞呈棕色或者綠色，即表示H2O2過濃。若H2O2加于玻片上無氣泡，則表示無效；
4.染色液pH為5.5；
5.試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止應(yīng)光線照射而失效。
客服一
