【核酸提取】RNA提取與DNA的提取簡介
閱讀次數(shù)：402 發(fā)布時間：2023/5/23 10:50:21
核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。
核酸的分子量大，從數(shù)萬到億萬。核酸是兩性化合物，在一定的等電點(diǎn)溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。細(xì)胞內(nèi)的核酸常和蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質(zhì)溶液中 的溶解度有顯著區(qū)別，在一定濃度范圍的氯化鈉溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度隨著氯化鈉濃度的增加而逐漸下降，當(dāng)氯化鈉濃度為0.14mol/L時，其溶解度僅為水中溶解度的1/100，但當(dāng)氯化鈉濃度在增加時，脫氧核糖核蛋白的溶解度重新增加，氯化鈉濃度增加到0.5mol/L時，其溶解度與水中溶解度相似，當(dāng)氯化鈉濃度增加到1mol/L時，它的溶解度比在水中大2倍。核糖核蛋白在0.14mol/L氯化鈉溶液中仍有相當(dāng)大的溶解度，因此常用0.14mol/L氯化鈉溶液提取核糖核蛋白。而提取脫氧核糖核蛋白時，則用1mol/L氯化鈉溶液。兩種核糖核蛋白的溶解度與溶液的pH也有關(guān)，當(dāng)pH值為4.2時，脫氧糖核蛋白的溶解度zui低，而pH值為2.0~2.5時，核糖核蛋白的溶解度zdi。所以調(diào)節(jié)氯化鈉溶液的濃度和pH值，可使核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白分離開來。
RNA的提取
RNA的提取，通常是用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織做均漿并反復(fù)提取細(xì)胞質(zhì)中的核糖核蛋白，而留下含有DNA的細(xì)胞核物質(zhì)，然后用10%醋酸調(diào)至pH值為4.2時，產(chǎn)生沉淀，離心，棄去上清液，先用0.5mol/L氯化鈉溶液，后用水洗滌沉淀，將核糖核蛋白溶解于0.5mol/L碳酸氫鈉溶液中，離心在取上清液，調(diào)節(jié)pH值為4.2的沉淀，沉淀用0.5mol/L氯化鈉溶液洗滌，再一次除去脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質(zhì)可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去，核酸留在碳酸氫鈉水溶液中，加入乙醇，RNA即以鈉鹽形式沉淀出來。
DNA的提取
DNA主要存在于細(xì)胞核中，天然狀態(tài)的DNA絕大多數(shù)是以脫氧核糖核蛋白形式存在的。從人體細(xì)胞中提取DNA時，一般先獲得脫氧核糖核蛋白，再將蛋白質(zhì)除去，從中分離DNA。常用的方法是以1mol/L氯化鈉溶液抽提，得到的脫氧核糖核蛋白溶液與含有少量辛酸或戊酸的氯仿一起振蕩，除去蛋白質(zhì)；或者在組織細(xì)胞破碎后以低濃度0.14mol/L氯化鈉溶液（也可用0.1mol/L氯化鈉加0.05mol/L檸檬酸代替）反復(fù)洗滌除去核糖核蛋白，再以1mol/L氯化鈉抽提脫氧核糖核蛋白，提取是用氯仿-戊酸抽提法除去蛋白質(zhì)。兩種方法比較，后一種方法使核酸降解可能少一些。以稀鹽溶液提取DNA時，加入適量去污劑更有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離。
客服一
