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組織固定固定液的選擇標(biāo)準(zhǔn)
閱讀次數(shù):510 發(fā)布時間:2023/11/17 11:04:36
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影響標(biāo)本固定的因素很多,如組織與固定液的比例、固定時間、固定溫度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所選固定液不當(dāng),細胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂類、核 酸等成 分將會有不同程度地損失。固定劑好隨配隨用,并注意其濃度和酸堿度。因此根據(jù)實際工作的目的,選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及適用范圍。

1.單純固定液

(1)4%中性甲醛固定液:常用的固定液,能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標(biāo)本均適用。尤其值得注意的是,中性甲 醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時間不 超過一個月。
甲醛(40%) 100 ml
無水磷酸氫二鈉 6.5 g
磷酸二氫鈉 4.0g
蒸餾水 900 ml

(2)乙醇固定液:使用時以80%~95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對組織滲透力較弱,因此很少單獨使用,但其保存組織中的核酸強于中性甲醛,故常用于有核酸操作的實驗或檢查,如果用于證明尿酸結(jié)晶和保存糖原,可用100%乙醇固定組織。

(3)4%的多聚甲醛:主要用于培養(yǎng)細胞的固定。

2.混合固定液

(1)乙醇一甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水。
甲醛(40%) 100 ml
95%乙醇 900 ml

(2)B5(醋酸鈉一升gong一甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織。染色應(yīng)進行脫gong沉淀處理。
無水醋酸鈉 1.25 g
升gong 6.0 g
蒸餾水 90 ml
使用加入甲醛 10 ml

(3)Bouin固定液:特別適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻,收縮很少,不會使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。
飽和ku味酸水溶液(約1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰cu酸 5 ml

(4)Carnoy固定液:穿透能力強,可很好的固定細胞質(zhì)和細胞核,特別適合于固定外膜致密的組織,亦適用于糖原及尼氏小體的固定。
無水乙醇 60 ml
lv仿 30 ml
冰cu酸 10 ml

(5)Zenker固定液:經(jīng)此液固定的標(biāo)本,細胞核和細胞質(zhì)染色頗為清晰,但成本較昂貴且需特殊處理gong。該固定液要避免接觸陽光,以免引起化學(xué)變化而失效。
升gong 5.0 g
重鉻suan鉀 2.5 g
硫酸鈉 1.0g
蒸餾水(加至) 100 ml
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