流式細胞術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）是一種綜合應用光學、機械學、流體力學、電子計算機、細胞生物學、分子免疫學等學科技術(shù)，使被測溶液流經(jīng)測量區(qū)域，并逐一檢測其中每一個細胞的物理和化學特性，從而對高速流動的細胞或亞細胞進行快速定量測定和分析的方法。
先，待測細胞經(jīng)處理或染色后被壓人流動室，與此同時，不含細胞的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度，這樣鞘液就能被包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在包繞下單行排列，依次通過檢測區(qū)域。在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩個光源信號分別反映了細胞體積的大小和內(nèi)部的信息。經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號，再通過模，數(shù)轉(zhuǎn)換器。將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號，經(jīng)計算機處理，可將分析結(jié)果顯示在屏幕上。
為了保證細胞單個排列地逐一通過檢測區(qū)域，鞘流技術(shù)在流式細胞術(shù)中被廣泛應用。根據(jù)層流理論，由于兩種液體的流速和壓力不同。在一定條件下樣品溶液與包裹它的鞘液在流動中可以保持相互分離并且同軸。同時鞘液流可以加速樣品溶液中顆粒的流動并迫使他們的流動軌跡保持在液流的中軸線上，使細胞單排列地逐一通過檢測區(qū)域，這便是所謂的液流聚焦原理。
流式細胞術(shù)實驗：1、制備細胞懸液，計數(shù)
2、分裝，按照每個EP（1.5ml）管1-2*10 6個細胞分裝，3500rpm，4度離心。
3、用100ulPBS重懸，加入10ul大鼠血清封閉，4度避光30min。
4、加入相應的熒光標記的
抗體，混勻，避光，4度孵育30min。
5、加入1mlPBS洗兩遍。
6、用200ul PBS重懸，經(jīng)紗布過濾轉(zhuǎn)至流式管，上檢測。
細胞或者大小接近的顆粒物質(zhì)都可以檢測。樣本通過鞘液的輸送，成單個隊列依次通過激光束。樣本事先可以根據(jù)檢測需要被熒光標記，通過激光束的時候就會得到熒光信號，被記錄下來。可以同時標記不同的熒光標記做不同的檢查。優(yōu)點就是可以在短時間內(nèi)檢測大量的樣本（每幾千個到幾萬個細胞）。
主要應用于各種生物醫(yī)學研究和臨床診斷。上通用的白細胞和淋巴瘤的診斷標準就是靠流式細胞儀的分型來確定的。
客服一
