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重組蛋白的特性與使用注意事項(xiàng)
閱讀次數(shù)：346 發(fā)布時(shí)間：2024/9/12 10:01:32

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重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式，原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài)，真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定，在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。

凍干粉在使用需進(jìn)行溶解，其中溶解的方法非常關(guān)鍵，因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。

溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意，這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。

（1）原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白，已經(jīng)從包涵體中提純，添加了蛋白保護(hù)劑，使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可，復(fù)溶凍干蛋白 100ug，用 86ul 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可完全溶解，一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。

（2）真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯，還要進(jìn)行翻譯后的加工，使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常，所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子，對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工，這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存，保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。

（3）重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集，甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。

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