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產品名稱：塞內卡病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

規(guī) 格：50T/盒
反應體積：25μL
試劑類型：液體

產品簡介：塞內卡病毒（Seneca virus A, SVA），曾被稱為塞內卡谷病毒（Seneca valleyvirus, SVV），為無囊膜的單股正鏈 RNA 病毒，是小 RNA 病毒科塞內卡病毒屬成員，基因組全長約 7.2kb。SVA 主要導致發(fā)病豬蹄部和口鼻出現(xiàn)水皰、潰爛、跛行；新生仔豬出現(xiàn)腹瀉、神經癥狀并引起急性死亡，死亡率在 15%~30%。目該病在我國個別地區(qū)零星散發(fā)，有流行擴大的趨勢，對我國生豬產業(yè)造成潛在威脅。本產品是基于染料法熒光定量 PCR 原理開發(fā)，門檢測塞內卡病毒的試劑盒。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)塞內卡病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 基于染料法 qRT-PCR 檢測，靈敏度比常規(guī) RT-PCR 高 10-100 倍，可以達到至少 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 qRT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR，只能用于科研，不能用于臨床

【使用方法】

一、試劑準備（在試劑準備區(qū)進行）

1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。

2. 根據(jù)待測樣本、陰性對照、陽性對照的數(shù)量，按下表1單反應體系配制方法，取相應量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應分裝到PCR反應管中，瞬時離心后備用。

表1：單反應體系配制方法

二、樣本準備（在樣本準備區(qū)進行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。

2. 取出樣本后混勻，將陰性對照、待測樣本、陽性對照各5 μL加入到PCR反應管中混勻。

3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。

4. 將PCR反應管轉移到擴增區(qū)進行上機。

三、PCR（在核酸擴增區(qū)進行）

1. 將上述PCR反應管按照實驗布局依次放入PCR儀對應檢測孔內，并記錄順序。

2. 按表2設置PCR擴增循環(huán)參數(shù)。

表2：PCR擴增相關參數(shù)

【結果分析】

表3：結果分析表

【注意事項】

1. 使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理。

2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結束后，應立即對工作臺進行清潔消毒。

3. 吸取反應液時，應盡量避免產生氣泡。上機，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結果不準確。

4. 檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內，檢測結束的PCR反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

5. 工作臺及各種實驗用品應定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒。

6. 試劑使用應在常溫下充分融化并混勻。不同批號的試劑請勿混用，并在有效期內使用。

【儲存條件與有效期】

試劑盒應置于-20℃冷凍避光貯存；

試劑盒保存有效期為12個月；

試劑盒反復凍融次數(shù)不宜超過5次。

原創(chuàng)作者：上海遠慕生物科技有限公司

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