詳細(xì)內(nèi)容
點(diǎn)擊次數(shù)：502 發(fā)布時(shí)間：2024/11/18
產(chǎn)品名稱：牛傳染性鼻氣管炎病毒熒光PCR檢測試劑盒
規(guī) 格：50T/盒
反應(yīng)體積：25μL
試劑類型：液體
產(chǎn)品及特點(diǎn):
牛傳 染性鼻氣 管炎病毒(IBRV)是犢牛主要的病 毒性 病原體。牛傳 染性鼻氣 管炎又稱“壞死性鼻 炎”、“紅鼻病”,是牛傳 染性鼻氣 管炎病毒引起的一種牛呼 吸道接觸性傳染病。臨床表現(xiàn)形式多樣,以呼 吸道為主,伴有結(jié) 膜炎、流 產(chǎn)、乳 腺炎,有時(shí)誘發(fā)小牛腦 炎等。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的門檢測牛傳 染性鼻氣 管炎病毒的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)牛傳 染性鼻氣 管炎病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他細(xì)菌的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
產(chǎn)品內(nèi)容：
| 成分 | 規(guī)格 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5ml |
| 熒光 PCR 用模板稀釋液 | 1ml |
| 超純水 | 1ml |
| 牛傳染性鼻氣管炎病毒 qPCR引物-探針干粉 | 50次 |
| 牛傳染性鼻氣管炎病毒 qPCR陽性對(duì)照(1×10E7 拷貝/μL) | 50ul |
| 使用手冊 | 1份 |
注意：引物-探針干粉在使用需要短暫離心，然后在離心管中加入 165 μL 的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。
【使用方法】
一、試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）
1. 取出包裝盒中的各組分，室溫放置，待其完全融化，混勻后備用。
2. 根據(jù)待測樣本、陰性對(duì)照、陽性對(duì)照的數(shù)量，按下表1單反應(yīng)體系配制方法，取相應(yīng)量的試劑，充分混勻成PCR-Mix，按照20 μL/反應(yīng)分裝到PCR反應(yīng)管中，瞬時(shí)離心后備用。
表1：單反應(yīng)體系配制方法
| 試劑 | 反應(yīng)液 | 混合酶 |
| 用量 | 19 μL | 1 μL |
二、樣本準(zhǔn)備（在樣本準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）
1. 使用商品化的病毒核酸提取試劑盒，參照說明書進(jìn)行操作，提取好的核酸樣本如不能立即檢測，建議-70℃以下保存。
2. 取出樣本后混勻，將陰性對(duì)照、待測樣本、陽性對(duì)照各5 μL加入到PCR反應(yīng)管中混勻。
3. 蓋上管蓋，2000 rpm離心30。
4. 將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)。
三、PCR（在核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行）
1. 將上述PCR反應(yīng)管按照實(shí)驗(yàn)布局依次放入PCR儀對(duì)應(yīng)檢測孔內(nèi)，并記錄順序。
2. 按表2設(shè)置PCR擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)。
表2：PCR擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)
| 體系 | 反應(yīng)體系設(shè)為25 μL | ||
| 信號(hào)采集 | 選擇FAM通道檢測H5亞型； 選擇CY5通道檢測H7亞型； 選擇ROX通道檢測H9亞型。 | ||
| PCR 反應(yīng) 條件 | 階段 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃：30 min | 1 | |
| 預(yù)變性 | 95℃：5 min | 1 | |
| PCR | 95℃：15 sec | 45 | |
| 60℃：30 sec （此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)） | |||
【結(jié)果分析】
表3：結(jié)果分析表
| 實(shí)驗(yàn)成立 條件 | 陰性對(duì)照 | 三通道Ct＞38或者No Ct，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。 |
| 陽性對(duì)照 | 三通道Ct≤30且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線。 | |
| 樣本結(jié)果 判定標(biāo)準(zhǔn) | H5亞型 陽性 | FAM通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線。 |
| H7亞型 陽性 | CY5通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線。 | |
| H9亞型 陽性 | ROX通道Ct≤35且出現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線。 |
| 結(jié)果可疑 | 任一通道35＜Ct≤38，建議復(fù)測，復(fù)測結(jié)果仍為可疑，且出現(xiàn)明顯指數(shù)增長，判為陽性。否則為陰性。 |
| 結(jié)果陰性 | Ct＞38或者No Ct，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。 |
【注意事項(xiàng)】
1. 使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理。
2. 各區(qū)域物品均為用，不得交叉使用，以免污染。檢測結(jié)束后，應(yīng)立即對(duì)工作臺(tái)進(jìn)行清潔消毒。
3. 吸取反應(yīng)液時(shí)，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡。上機(jī)，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確。
4. 檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢液缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR反應(yīng)管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。
5. 工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。
6. 試劑使用應(yīng)在常溫下充分融化并混勻。不同批號(hào)的試劑請勿混用，并在有效期內(nèi)使用。
【儲(chǔ)存條件與有效期】
試劑盒應(yīng)置于-20℃冷凍避光貯存；
試劑盒保存有效期為12個(gè)月；
試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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